誘導(dǎo)培養(yǎng)基有什么特點(diǎn)？
（1）針對(duì)特定種屬細(xì)胞優(yōu)化的培養(yǎng)體系；
（2）多個(gè)方向誘導(dǎo)：成骨、成脂、成軟骨、成肝、成神經(jīng)元、成星形膠質(zhì)、EB形成等；
（3）性能穩(wěn)定，誘導(dǎo)分化效果好。
為了提高溶解度，最常使用哪些標(biāo)簽？最常使用什么標(biāo)簽進(jìn)行純化？
通常，我們?cè)谑褂貌溉閯?dòng)物表達(dá)產(chǎn)生重組蛋白時(shí)不會(huì)遇到不溶性問題。大多數(shù)時(shí)候，哺乳動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)是完全加工的分泌蛋白質(zhì)，因此沒有不溶性問題。對(duì)于困難蛋白質(zhì)諸如膜蛋白，我們通常使用含有去污劑的商業(yè)試劑來裂解細(xì)胞以用于檢測(cè)和定量目的。常規(guī)使用的標(biāo)簽包括His標(biāo)簽、Fc融合標(biāo)簽和Flag標(biāo)簽。
內(nèi)毒素是如何控制的？金斯瑞的內(nèi)毒素水平能做到什么標(biāo)準(zhǔn)？
蛋白部原核系統(tǒng)去除內(nèi)毒素有三個(gè)水平<1EU/μg（1000EU/mg）、<0.1EU/μg（100EU/mg）、 <0.01EU/μg（10EU/mg），1EU/mg較難做到，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)做到1EU/mg容易一些，抗體可以做到0.5EU/mg，應(yīng)用于小鼠的典型控內(nèi)毒蛋白需求是<3 EU/mg，應(yīng)用于人的典型控內(nèi)毒蛋白需求是<1 EU/mg。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)是10EU/mg，但金斯瑞不默認(rèn)檢測(cè)內(nèi)毒素含量，如果客戶要求最終提供內(nèi)毒素QC數(shù)據(jù)，如果客戶有內(nèi)毒素控制需求，需要在實(shí)驗(yàn)開始前提出。 通過控制試劑，容器以及表達(dá)純化過程中的內(nèi)毒素引入來控制內(nèi)毒素水平。如果內(nèi)毒素水平仍然較高，可以通過去內(nèi)毒的柱子或是離子柱進(jìn)一步去除。
抗體純化你們采用什么純化方法？
一般采用Protein A或者Protein G純化。
蛋白表達(dá)過程中，雜質(zhì)有些什么？如何去除這些雜質(zhì)？金斯瑞內(nèi)部有哪些蛋白純化方法？如何選擇使用哪種純化方法？多步純化常用純化流程？
能提供親和純化，離子交換層析，疏水層析和分子篩層析。雜質(zhì)大多是細(xì)胞內(nèi)或培養(yǎng)基內(nèi)的物質(zhì)，可以通過層析技術(shù)去除。
一般對(duì)于含有親和標(biāo)簽的蛋白，首選親和層析后根據(jù)得到的蛋白純度以及雜蛋白的位置性質(zhì)，相應(yīng)選擇多步純化的步驟。
干細(xì)胞傳代的注意事項(xiàng)有哪些？
（1）胰酶濃度：推薦胰酶使用濃度為0.25%-0.04%EDTA，使用之前需預(yù)熱至37℃且pH值應(yīng)維持在7.2左右。切忌消化過度（包括胰酶濃度過高、消化時(shí)間過長等），否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡、分化、狀態(tài)變差，分化能力丟失等現(xiàn)象。細(xì)胞消化過程中需要在顯微鏡下觀察細(xì)胞的消化程度，當(dāng)看到大部分細(xì)胞變圓不貼壁，拍打培養(yǎng)瓶兩側(cè)會(huì)有大量細(xì)胞脫落，此時(shí)應(yīng)立即終止消化，若細(xì)胞仍有大部分貼壁，可適當(dāng)延長消化時(shí)間以避免消化不徹底的情況出現(xiàn)。
（2）細(xì)胞的差異：不同種類的干細(xì)胞差異很大，特別是與腫瘤細(xì)胞株的差異更大，很多經(jīng)驗(yàn)不可以直接使用，消化時(shí)需要仔細(xì)摸索最佳的時(shí)間。
（3）接種密度：干細(xì)胞傳代過程中接種密度至關(guān)重要，如果太低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢，甚至導(dǎo)致細(xì)胞老化，而細(xì)胞的老化是不可逆轉(zhuǎn)的。一般細(xì)胞接種密度為20000個(gè)活細(xì)胞/cm2即50 0000個(gè)活細(xì)胞/T25，不同的干細(xì)胞接種密度會(huì)稍有差異，比如hMSC，我們推薦的傳代接種比例為1:2。
血清融解后或者配制成完全培養(yǎng)基后出現(xiàn)絮狀沉淀是什么原因？
培養(yǎng)基出現(xiàn)的絮狀物是血清融解過程中所釋出的蛋白，不同批次的培養(yǎng)基蛋白釋出的情況也不同，屬于正?，F(xiàn)象。
細(xì)胞和培養(yǎng)基的保存條件及時(shí)間？
細(xì)胞：細(xì)胞接收之后請(qǐng)檢查干冰、細(xì)胞冷凍管是否有融化、解凍情形，若有請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我公司銷售人員。如不馬上復(fù)蘇必須立即置于液氮保存，保存時(shí)間可長達(dá)幾年。
培養(yǎng)基：添加物和基礎(chǔ)培養(yǎng)基按照標(biāo)簽所示溫度分開保存時(shí)間為1年；混合之后必須避光保存在2-8℃，推薦在一個(gè)月內(nèi)使用完。同時(shí)減少敞開蓋子的時(shí)間，避免培養(yǎng)基pH變化導(dǎo)致使用效果不佳。
蛋白的分子量（MW）對(duì)蛋白生產(chǎn)有影響嗎？
金斯瑞的蛋白服務(wù)能表達(dá)分子量10-250KD的蛋白（大腸桿菌系統(tǒng)：150KD；其它系統(tǒng)：250KD）。生產(chǎn)更大分子量的蛋白會(huì)越來越困難，因?yàn)榉肿恿窟^大的蛋白在表達(dá)時(shí)極易降解或者表達(dá)困難。
對(duì)于抗體制備，對(duì)抗原蛋白是否有特殊要求？
抗原（蛋白）需要溶于PBS或者其他的不含有機(jī)溶劑的緩沖液中?？乖鞍滓话愀驇?biāo)簽（如6xHis，HA，F(xiàn)LAG，V5，c-myc）。對(duì)于單克隆抗體的制備，要求蛋白抗原含量應(yīng)大于2mg，純度大于75％。用于診斷型或功能型單克隆抗體的開發(fā)的抗原，需要更高的純度，一般需要85％-90％的純度；對(duì)于多克隆抗體的制備，蛋白抗原含量應(yīng)大于4mg，純度大于85％（如需獲得純化的多克隆抗體，則請(qǐng)另外提供5mg抗原蛋白）。濃度一般要求>0.4mg/ml。
